Assassin's Creed II põe desta vez o jogador no controle de Ezio, um rapaz que vive na antiga itália de 1476. Seguindo o conceito do último título, Desmond deverá reviver suas memórias em busca do Piece of Eden, mas desta vez estará na pele de Ezio, que se esforça e evolui para tornar-se um dos melhores assassinos. Desta vez é possível nadar, esconder-se nos canais e mesmo dirigir barcos pequenos por Veneza. O mais interessante é a aparição do jovem Da Vinci e a possibilidade de usar suas invenções, algo inovador que acrescenta ainda mais interesse à hsitória.